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IPTG的作用

作者:北京索莱宝科技有限公司 2015-09-28T00:00 (访问量:5476)

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IPTG的作用

异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一种作用极强的诱导剂,因不被细菌代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用

诱导原理

E.coli的乳糖操纵子(元)含ZYA三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶,此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节基因II基因编码一种阻遏蛋白,后者与O序列结合,使操纵子(元)受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个分解(代谢)物基因激活蛋白(CAP)结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区,三个酶的编码基因即由同一调控区调节,实现基因产物的协调表达。

 

在没有乳糖存在时,lac操纵子(元)处于阻遏状态。此时,I序列在PI启动序列操纵下表达的Lac阻遏蛋白与O序列结合,阻碍RNA聚合酶与P序列结合,抑制转录起动。当有乳糖存在时,lac操纵子(元)即可被诱导。在这个操纵子(元)体系中,真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞,经β-半乳糖苷酶催化,转变为异乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白,使蛋白构象变化,导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。

作用机制

IPTG是β-半乳糖苷酶的活性诱导物质。基于这个特性,当pUC系列的载体DNA(或其他带有lacZ 基因载体DNA)以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入XgalIPTG,由于β–半乳糖苷酶的α-互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出基因重组体。此外,它还可以作为具有lactac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。

使用方法

IPTG配制成23.83 mg/ml100 mM)的水溶液,并进行过滤除菌后保存。然后在100 ml的琼脂培养基中,加入100 μl的上述溶液、200 μlX-Gal20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μlAmp100 mg/ml),制作成IPTGX-GalAmp平板培养基。当DNA片段插入至pUC系列载体(或其他带有lacZAmp基因载体),然后转化至lacZ缺失细胞中后,涂布上述的IPTGXGalAmp平板培养基,可根据长出菌体的蓝白色,而方便地挑选出基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组体)。

北京索莱宝科技有限公司备有现货产品异丙基硫代半乳糖苷(IPTG),货号为I8070,可用于诱导外源基因的表达,普遍应用于原核表达系统,使其表达量增高,产物稳定,具有易鉴定,易纯化的优点。保存温度: 2-8°C冷藏保存,配制好后保存于-20°C,室温可放置一个月。

 

 

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