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ER-Tracker:探索内质网的利器

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2024-11-21T00:00 (访问量:15569)

内质网

内质网是由一层单位膜围成的连续的网状膜系统,可分为糙面内质网(Rough Endoplasmic Reticulum,RER)和光面内质网(Smooth Endoplasmic Reticulum,SER)。

 

内质网染色的意义

1、观察内质网形态结构:

染色后可以在显微镜下清晰地观察到内质网的形态、大小、分布以及与其他细胞器的关系。这有助于深入了解内质网在不同细胞类型、不同生理状态下的结构特点,为研究内质网的功能提供基础。

2、疾病诊断

在某些疾病状态下,内质网的结构和功能会发生改变。通过内质网染色可以观察到这些变化,为疾病的诊断提供线索。例如,在一些神经退行性疾病、肝脏疾病和癌症中,内质网的形态和分布可能会出现异常。

3、病理机制研究:

有助于研究疾病发生发展的病理机制。例如,在一些内质网应激相关疾病中,内质网染色可以揭示内质网应激的程度和持续时间,以及内质网应激对细胞功能和存活的影响。

 

ER-Tracker介绍

ER-Tracker是一种用于标记和研究细胞内质网的荧光探针。它能够特异性地结合内质网,发出明亮的荧光信号,使研究人员能够在显微镜下清晰地观察内质网的形态、结构和动态变化。ER-Tracker广泛应用于细胞生物学、生物医学等领域,为研究内质网的功能和相关疾病提供了重要的工具。

 

应用原理

ER-Tracker通常是一种小分子荧光染料,其分子结构中含有能够与内质网特异性结合的基团。当ER-Tracker进入细胞后,会通过扩散或主动运输等方式进入内质网,并与内质网中的特定分子结合。这种结合是高度特异性的,使得ER-Tracker能够在细胞内选择性地标记内质网,而不与其他细胞器发生非特异性结合。不像传统的DiOC6(3),该系列探针几乎不对线粒体着色,且在较低浓度即可实现对内质网的染色,且对细胞几乎无毒性。使用以下提供的优化步骤对活细胞染色后用醛固定,可以部分保留活细胞的染色特征。

 

运输和保存方法

冰袋运输。≤-20℃避干燥保存,一年效期。避免反复冻融。

 

使用方法

1. 使用前将ER-Tracker Blue-White DPX 回温至室温,并简短离心使该DMSO溶液至管底。

2.  将1 mM ER-Tracker Blue-White DPX储存液按照实验要求稀释至工作浓度,推荐工作浓度 100 nM-1µM。建议在不影响 实验结果的前提下尽量使用较低浓度探针,以避免由于浓度过高染色导致的假象。

注:使用含Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡盐溶液(HBSS/Ca/Mg)稀释该探针进行染色,可得到最佳实验结果。

1. 染色对于贴壁细胞,吸除培养皿中培养基,用HBSS清洗细胞,加入预热的染料工作液于37℃孵育细胞15-30 min。吸除染色液,加入不含探针的新鲜培养液,并在荧光显微镜下观察细胞。

注:由于ER-TrackerBlue-White DPX 探针具有较高光敏感性,会产生波动较大的发射吸收峰值,使用长通 DAPI 滤光片效果最理想。另,操作过程中需尽量避光。

 

常见问题

Q: 请问固定后的死细胞还能染上吗?

A: 该探针主要染的是活细胞的内质网,固定样本基本染不上色。

Q: 染色之后可以加抗荧光淬灭剂防止荧光淬灭吗?

A: 活细胞的染色,不需要加抗荧光淬灭封片液。

Q: 请问mito-tracker green 和 ER-traker red是同时染还是分开依次染,染完后荧光可持续多久(也就是在多长时间内还可以检测)?

A: 建议分开依次染色,荧光均存在淬灭的现象,染色完建议尽快检测,一般1小时内检测荧光强度基本变化不大。

 

相关产品

产品名称

货号

规格

ER-TrackerBlue-White DPX, for live-cell imaging
内质网蓝色荧光探针(活细胞)

40761ES50

50µl

ER-TrackerGreen (BODIPY® FL Glibenclamide), for live-cell imaging  
内质网绿色荧光探针(活细胞)

40763ES20

20µl (1mM)

ER-TrackerRed (BODIPY® TR Glibenclamide), for live-cell imaging  
内质网红色荧光探针(活细胞)

40764ES20

20µl (1mM)

 

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