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SD大鼠骨髓间质干细胞培养干货!

作者:上海中乔新舟生物科技有限公司 2022-01-11T15:41 (访问量:13020)

SD大鼠骨髓间充质干细胞简单介绍:
骨髓原始间充质干细胞(SD大鼠骨髓间充质干细胞)是骨髓基质干细胞,是人们在哺乳动物的骨髓基质中发现的一种具有分化形成骨、软骨、脂肪、神经及成肌细胞的多种分化潜能的细胞亚群。它们对骨髓中的造血干细胞(HSC)不仅有机械支持作用,还能分泌多种生长因子(如IL-6,IL-11,LIF,M-CSF及SCF等)来支持造血。
 常用的分离MSC的方法主要有全骨髓法和密度梯度离心法,(SD大鼠骨髓间充质干细胞)全骨髓法即根据干细胞在低血清培养基中有贴壁优势特性,定期换液除去不贴壁细胞,从而达到纯化及扩增MSC的目的。密度梯度离心法即根据骨髓中各细胞成分比重的不同,分离单核细胞进行贴壁培养。二者本质上无多大区别。随着对MSC表面抗原认识的深入,又有人利用免疫方法如流式细胞仪法、免疫磁珠法等对其进行分离纯化。但经过流式或磁珠分选后的细胞出现了增殖缓慢等一些问题,加之成本较高和技术的难度,在某种程度上限制了这些方法的广泛应用。

常见分离方法
目前BMSCs的分离方法主要有:
✦ 贴壁分离法:根据BMSCs的粘附特性来实现分离贴壁的方法;
✦ 密度梯度离心法:根据BMSCs与其他细胞的密度不同来分离的方法;
✦ 流式细胞仪分离法:根据细胞大小或者根据细胞表面的一些特殊标志来分离的方法。

密度梯度离心法与流失细胞仪分离法价格昂贵且操作复杂、容易导致细胞大量流失,应用相对较少。贴壁培养法应用最早,具有操作简单,对细胞干扰少,不易发生污染等特点较为广泛应用,其缺点是细胞纯度较低,但有关研究表明,BMSCs细胞扩增到P1、P2代后细胞的纯度分别可达到95%、98%。
大鼠骨髓间充质干细胞细胞传代能力测试
批次323363

大鼠骨髓间充质干细胞生长快速,高密度会影响细胞干性,建议按照1:3比例传代细胞,传代建议使用胰酶浓度为0.05%进行消化。消化每t25培养瓶加胰酶1ml。消化时间约1-2min内,t25培养瓶培养液约7ml完全培养基。
本次验证:传代图如下(4X)
P1-P5代,按照1:3比例传代,48H(隔天)传代一次。每次细胞状态和增殖能力均良好。
P6-p8代1:3传代,72h(隔两天)传代一次。
P8-P10代1:3传代,144h(隔6三天)传代一次。
此时细胞个体变大,生长速度明显减慢。



SD大鼠骨髓间质干细胞质检报告

货号:ZQ0277
细胞形态图:
细胞处于快速分裂的状态,良好的MSCs显示较小的纺锤状的形态,伴有较多的折光的双联体,为新的正在分裂的细胞。细胞首代状态较好,多数呈长梭形生长,部分不规则,极性良好,经传代 5次后,细胞仍较有活力。以1:2 的分种率传代,约48h可长满。


分化测试


1. 成脂诱导分化
细胞汇合度约达 80%时,加入间质干细胞成脂诱导液后,细胞回缩较明显。11 天后已有大量脂滴出现,培养21天后进行油红O 染色,可见被染为红色的较标准的脂滴。

油红O染色试剂盒描述:

油红O是一种脂溶性重氮染料,用于染色细胞和组织中的脂质和脂肪沉积物。虽然样品可能是新鲜的,冷冻的或福尔马林固定的,但油红O与石蜡包埋的组织切片不相容。观察油红O沉淀是正常的。因此,必须使用Whatman纸或注射器驱动的过滤器单元通过过滤新鲜制备工作溶液。
货号:0843。可点击官网咨询查看哦!

2.成骨诱导分化

细胞汇合度约达 70%时,加入间质干细胞成骨诱导液,诱导 21 天可见钙结质,进行茜素红染色鉴定, 茜素红与类骨质结合,形成同心圆状的深红色小结节。


茜素红S染色试剂盒描述:

茜素红S (Alizarin Red S,简称ARS )作为一种染料型配位剂在分光光度分析方面已有了广泛的应用。近年来,很多作者把 ARS 及其金属配位物在*电极上的吸附催化波用于电分析中,提高了测定的灵敏度和选择性。货号:0223可点击官网咨询查看哦!

3.成软骨细胞分化
细胞汇合度约达 70%时,加入间质干细胞成骨诱导液诱导 21 d 后,使用甲苯胺蓝染色可见较广泛的细胞外基质蓝紫色,尤其在细胞堆积区,图中为细胞密度稍低的区域也可见明显的异染颗粒。

阿利新蓝染色试剂盒描述:

阿尔辛蓝是一种用于检测细胞软骨形成的染料,它可以染色软骨组织中的硫酸化蛋白多糖。阿尔辛蓝染色试剂盒含有1%的阿尔辛蓝溶液,0.1%的核固红,方便,即用型溶液。在pH 2.5时,阿尔辛蓝染色酸性粘多糖并显示蓝色,而核固红染色核粉红色至红色,细胞质淡粉红色。货号:8378,可点击官网咨询查看哦!


表面分子流式检测

CD29:来源 THermoFisher PE
CD90:来源 THermoFisher PE
CD45:来源 THermoFisher FITC


*产品详情请见中乔新舟官网:https://www.zqxzbio.com/
或致电咨询:400-038-9959
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1、原代细胞:人脐静脉内皮细胞、人脐带间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、iPS诱导多能干细胞(可提供细胞流式及免疫荧光鉴定报告,需签订MTA协议)。
2、培养基:原代细胞专用低血清、无血清、无异源蛋白无动物成分培养基。
3、细胞培养试剂:胎牛血清、原代细胞转染试剂盒、细胞实验检测试剂盒、细胞生长因子、ELISA试剂盒、定量PCR芯片试剂盒、DNA/RNA及细胞裂解物等。
4、细胞系(株):种类丰富,已通过STR鉴定;提供细胞株完全培养基。
5、自研产品:支原体检测/清除试剂盒、端粒酶检测试剂盒、人源/动物源ELISA试剂盒等系列产品。
6、技术服务:细胞荧光标记服务(GFP/RFP/LUC)、干扰/过表达稳转株构建、细胞基因敲除、细胞系鉴定服务(STR)、原代细胞永生化、肿瘤细胞耐药株构建、原代细胞分离等。

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