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细胞运输与储存

作者:南京森贝伽生物科技有限公司 2024-08-12T00:00 (访问量:11155)

科研细胞在当下已经成为一个重要的科研工具,运输成为重中之重,不知道有多少细胞噶在了路上,今天为大家介绍两种森贝伽常用的运输方式以及储存注意事项。

常温运输

🔹常温运输通常采用不透气瓶进行运输,待细胞生长至70-80%左右,镜下观察细胞状态无异常即可;

🔹将准备好的细胞灌满培养液,瓶口拧紧,缠上封口膜并用一次性自封袋包装放入特制泡沫盒即可运输;

🔹寒冷地区以及冬季运输需要长效高温暖宝宝维持细胞温度。

常温运输收货注意事项:

(1)及时拍摄培养瓶外观记录有无瓶子破损漏液的情况,去掉封口膜,75%酒精消毒瓶身后放入37℃培养箱静置3-4h。

(2)在显微镜下观察细胞状态,同时对细胞进行不同倍数拍照保存(4×,10×,20×各2-3张),作为售后依据。

(3)悬浮细胞和半贴壁半悬浮细胞离心运输的灌液培养基收集细胞。

(4)部分贴壁细胞有脱落或脱落后成团的现象,需离心瓶中灌液的培养基收集细胞。贴壁细胞镜下观察若密度低于60%,可弃除培养基后加入5-8mL新鲜完全培养基,放入培养箱继续培养;若密度达80%以上,可对细胞进行传代处理。收到货后第一次建议1:2的比例传代。

(5)运输过程中的灌液培养基不能再用来培养细胞,需更换新鲜完全培养基。

(6)夏季部分地区温度较高,常温发货细胞不能在没有空调的地方房太久,会影响细胞代谢,并且有微生物污染风险,一定注意无菌操作。

干冰运输

🔹细胞扩增好做完一系列检测和鉴定后冻存至工作细胞库;

🔹定期复苏检查细胞状态,准备两管放入自封袋贴好标签,埋入放满干冰的泡沫箱内即可打包。

干冰运输注意事项:

(1)开箱后核对细胞信息,将冻存管置于干冰上拍照留存,夏季气温较高,干冰易挥发,收到货后若干冰已经挥发干或冻存管破损开裂,请及时拍照与我们联系。

(2)若当天不复苏,请将细胞转移到液氮罐或-80℃冰箱中。

(3)干冰发货为两只冻存管,请先拿出一管复苏,另一管放入液氮保存,复苏第一管有问题及时与我们沟通,在技术支持指导下复苏第二管。

储存方式

当细胞汇合度达到80%-90%,即可传代培养或冻存。

收集细胞:

贴壁细胞:1、吸去培养液,加入不含钙镁的PBS,轻轻润洗瓶底1-2次,吸弃PBS;2、加入0.25%胰酶-EDTA消化液(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),铺匀瓶底放入培养箱中消化1-2min;(部分细胞贴壁较牢,可采用分步消化:将消化下来的细胞转移至离心管终止,在培养瓶中加入胰酶继续消化,直至大部分细胞脱落)3、倒置显微镜下观察大部分细胞变圆脱落,迅速加入完全培养基终止消化,完培与胰酶比例为2:1;4、轻轻吹打细胞后吸出转移至离心管中。

悬浮细胞及半贴半悬细胞注意收集上清。

离心:收集好的细胞在1000rpm条件下离心3~5min,离心好后弃除上清液。

冻存液重悬:细胞按照传代步骤收集细胞至离心管并计数,根据计数的密度决定细胞冻存数量,一般推荐细胞冻存密度为1×106-1×107个活细胞/管。离心后弃上清,加入配制好的冻存液重悬,分配到冻存管中,每管1mL。

冻存:将冻存管放入程序降温盒中进行梯度降温,然后放入-80℃冰箱降温,24h后将冻存管转入液氮罐中。若没有冻存盒,可于冰箱4℃放置30min,随后转移至-20℃冷冻2h,接下来将其放于-80℃超低温冰箱中过夜,最终放置于液氮中以长期保存。

通过以上步骤和注意事项,可以有效保证细胞在寄送过程中的稳定性和活性,从而确保实验结果的可靠性和可重复性。

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