CRISPR/Cas是一套最早在细菌中发现的由RNA引导的DNA内切酶系统。

2013年，CRISPR/Cas系统被证实能够在哺乳动物细胞中进行高效基因编辑。

目前，利用来自化脓性链球菌（Streptococcus pyogenes）的CRISPR/Cas9系统进行基因敲除已成为基因功能研究的重要手段。

此外，CRISPR/Cas9系统在新药研发、细胞治疗和生物生产等领域也在发挥越来越重要的作用。

Tip：什么是CRISPR/Cas9系统？

CRISPR/Cas9系统主要由gRNA（guide RNA）和Cas9蛋白两部分组成。特异性的gRNA与Cas9蛋白在细胞体内形成核糖核蛋白复合体（Ribonucleoprotein，RNP），通过特异性的gRNA与基因组特定位点DNA的互补序列结合，引导Cas9蛋白切割DNA双链，造成DNA双链的断裂（double-strand break，DSB）。

细胞利用体内自身的DNA修复途径进行DSB的修复。DNA修复途径主要有非同源末端连接（non-homologous end joining，NHEJ）和同源定向修复（homology-directed repair，HDR）两种途径。

在真核细胞中，DSB主要是通过NHEJ途径进行修复，这是一种非精确修复的方式，通常会导致在断裂位点插入或删除核苷酸（insertions or deletions，Indels）。当基因编码区产生的Indels为非三整数倍时，就会导致基因开放阅读框（open reading frames，ORFs）移码突变（frameshifts），从而破坏或改变基因功能。

从2013年首次宣布CRISPR/CAS9系统可以应用于哺乳动物开始，CRISPR技术正在基因编辑领域掀起一场新的革命，但在临床转化中仍面临着多样的技术瓶颈挑战：

1.基因编辑效率 2.特异性 3.递送手段

为帮助研究者轻松高效地完成细胞基因敲除实验，耐思重磅推出Quick-KO®基因敲除试剂盒。

Quick-KO®基因敲除试剂盒是一款即用型基因敲除试剂盒，针对人、小鼠等的编码基因，采用预设计方案，提供基因敲除实验过程中所需的关键试剂。

试剂盒原理

TracrRNA-crRNA在被融合为单链向导RNA（即sgRNA）时用来指导Cas9作用。针对目的基因，通过人工设计的sgRNA（small guide RNA, sgRNA）来识别目的基因序列，并引导Cas9蛋白酶进行有效切割DNA双链，形成DNA的双链断裂。在通常情况下，细胞会采用高效的非同源末端连接方式（Non-homologous End Joining, NHEJ）对断裂的DNA进行修复。但是，在修复过程中通常会发生碱基插入或缺失的错配现象，造成移码突变，使靶标基因失去功能，从而实现基因敲除。

试剂盒优势

• 即用型试剂、简化操作

NEST 基因敲除试剂盒包含已构建好的表达sgRNA和Cas9的质粒（或慢病毒）及基因型鉴定引物，客户可以直接使用，简单上手。

• 两种标记、灵活选择

NEST 基因敲除试剂盒内含sgRNA带有荧光（mCherry）和药筛（puro）双重标记，用户可以根据需要自行选择。

荧光标记便于使用流式细胞术对转染细胞进行分选，对于使用流式不便的用户，可使用药筛标记，避免流式分选，方便后续实验。

• 节省时间、缩短周期

NEST 基因敲除试剂盒是一款高效的基因编辑产品，在提高实验成功率的同时，缩短了实验的周期、降低经济成本，为后续科研奠定下良好基础。

耐思深耕医疗器械和生命科学领域高品质实验室耗材领域。在生命制药行业中围绕核酸提取与纯化、PCR/RT-PCR、实验室、基因敲除等方面成功构建了完善、成熟的自主产品开发体系，为客户提供一体化解决方案，为全球生命科学领域的研究与发展提供高质工具。

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