人脏器组织单核细胞分离液试剂盒-细胞生物学检测-试剂-生物在线
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人脏器组织单核细胞分离液试剂盒

人脏器组织单核细胞分离液试剂盒

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产品名称: 人脏器组织单核细胞分离液试剂盒

英文名称: Mononuclear cell separation reagent kit for human organ tissue

产品编号: P3910

产品价格: 0

产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷316A

品牌商标: solarbio

更新时间: 2024-12-05T09:48:33

使用范围: null

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人脏器组织单个核细胞分离液试剂盒

规格:3×200 mL/kit

保存:本产品对光敏感,应该室温避光储存,保质期 2 年。无菌开封后,保存于室温。 

组成:
各种动物脏器组织单个核细胞分离液 200mL
全血及组织稀释液 200mL
细胞洗涤液 200mL

单个核细胞分离方法
1. 制备脏器组织的单细胞悬液。
2. 取一支适当的离心管,加入与脏器组织单细胞悬液等量的分离液(分离液最少不得少于3 mL,总体积不能超
过离心管的三分之二,否则会影响分离效果)。
3. 小心吸取单细胞悬液加于分离液液面上,注意保持两液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取单细胞悬液,
然后小心的平铺于分离液上,因为两者的密度差异,将形成明显的分层界面。)
4. 室温,500~900g,离心20~30min。(根据脏器组织单细胞悬液的量
确定离心条件,单细胞悬液量越大,离心力越大,离心时间越长,
具体离心条件可以自行摸索,以达到最佳分离效果)。
5. 离心后,此时离心管中由上至下细胞分四层。第一层为稀释液层;
第二层为环状乳白色单个核细胞层;第三层为透明分离液层;第四
层为红细胞层。
6. 用吸管小心吸取第二层环状乳白色单个核细胞层至另一洁净的
15mL离心管中,向离心管中加入10ml细胞洗涤液洗涤白膜层细胞,
250g,离心10min。
7. 弃上清,5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心10min。
8. 重复步骤7
9. 弃上清,细胞重悬备用。 

脏器组织单细胞悬液的制备方法

脏器组织研磨的方法:
1. 无菌条件下摘取脏器组织,撕去被膜,用眼科剪将脏器组织剪成小块。
2. 将尼龙筛网或者是细胞过滤筛放置于平皿上,加入少量全血及组织稀释液(保证脏器组织及获得的细胞处于
液体环境中)。
3. 将脏器组织放置于筛网上,使用注射器活塞或者是无菌镊子来研磨脏器组织(尽量控制研磨力度,保持筛网
悬空,避免在皿底上直接研磨而造成大批细胞死亡)
4. 研磨完全后使用全血及组织稀释液冲洗筛网,收集细胞悬液,再经滤网过滤。
分层示意图

注:
A. 可用酶消化法,使用胶原酶对脏器组织组织进行消化,得到单细胞悬液。
B. 如果最终得到的细胞需要培养,那全过程所需试剂与器材均要求无菌。
C. 根据脏器组织的体积控制单细胞悬液的浓度在1亿~10亿个/ml。
 
注意事项:
A. 开封前颠倒混匀,本分离液为无菌产品,为延长分离液保存时间,请在无菌条件下启封,避免微生物污染。
B. 分离液使用时应始终保持室温(18℃~25℃),如室内温度较低,可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条
件下离心,可能会导致白膜层中红细胞污染加重。
C. 待分离的组织要求新鲜,避免冷冻和冷藏。
D. 部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其带有的静电作用,可能会导致细胞挂壁影响分离效果。
E. 如果要进一步对分离的细胞进行培养,那在制备单细胞悬液和分离过程中,注意无菌操作,避免微生物污染。

参考文献:
1. Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand J Clin Lab Invest Suppl. 1968; 97: 7. 
2. Ting A, Morris PJ. A technique for lymphocyte preparation from stored heparinized blood. Vox Sang. 1971 Jun;
20(6): 561-3. 
3. Boyum A. Separation of Blood Leucocytes, Granulocytes and Lymphocytes Tissue Antigens. 1974; 4(4): 269-74. 
4. Weisbart RH, Webb WF, Bluestone R, Goldberg LS. A simplified method for lymphocyte separation. Vox
Sang. 1972; 23(5): 478-80. 

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