背景介绍
凝胶层析原理简介
说到分子筛，大家肯定都不陌生。分子筛又叫做凝胶过滤层析、空间排阻色谱等，是应用蛋白质分子量或分子形状的差异去进行分离的一项蛋白纯化技术。通俗地说，该技术就是像筛子一样，将分子依据“高矮胖瘦”进行分离。
这项技术使用的填料，是一类多孔性天然来源的聚合物材料。在层析过程中，直径大于凝胶网孔的生物分子，只能沿凝胶颗粒间的空隙随溶剂流动，流程短，移动速度快，首先被洗脱；中等大小的分子，可以在凝胶颗粒内外分布，部分进入颗粒，因此在大分子物质和小分子物质之间被洗脱；直径小于凝胶凝胶网孔的生物分子，可以自由进出网孔，移动速率慢而最后被洗脱。
Fig. 1 凝胶层析原理图
凝胶过滤层析的应用
凝胶过滤主要应用于两类分离领域：
• 组分分离（脱盐/换液）：上样量可达柱体积的30%。
• 精细分离（分离不同大小分子量的生物分子）：上样体积为0.5%~4%，柱床高度通常高于60cm。
产品介绍
Bestdex G-25系列凝胶过滤介质
博格隆Bestdex G-25系列产品是以葡聚糖为基架材料制成的凝胶过滤介质，具有亲水、多孔的特性。
根据颗粒大小，博格隆Bestdex G-25系列推出了四种类型的产品：Bestdex G-25 C（Coarse，粗）、Bestdex G-25 M（Medium，中）、Bestdex G-25 F（Fine，细）、Bestdex G-25 SF（Superfine，超细）。
Bestdex G-25系列凝胶过滤介质技术参数
+颗粒大小呈正态分布，在该范围内的颗粒占总数的80%以上
++不同溶液中颗粒大小会有差异，本数据为在PBS中颗粒大小
+++BXK26/70，柱高60cm，压力0.3MPa测得
Fig. 2 博格隆Bestdex G-25系列
Bestdex G-25系列产品的主要特点
• 非吸附层析：靠分子量大小差异实现分离，无吸附与解吸附过程，样品回收率高。
• 操作条件温和：能够在相当广的温度范围内进行操作。
• 仅需一种缓冲液：全程仅需一种缓冲液即可完成实验，操作简单。
Bestdex G-25系列产品的应用领域
Bestdex G-25系列凝胶过滤介质通过分子筛效应，实现样品的分离纯化。常用于蛋白质、多糖、核酸等生物样品的缓冲液置换、脱盐和去除小分子物质，也可以用于多肽、寡核苷酸的分离纯化，以及抗生素、化学合成药物、天然产物的分离纯化，还可用于化工中纳米材料的提纯以及环保领域的污水处理等领域。
实际应用案例——缓冲液置换
• 层析柱：EzFast 5mL G-25 F x 2
• 平衡液：0.2M NaHCO3、0.5M NaCl，pH8.3
• 上样体积：1.9mL
Fig. 3 Bestdex G-25 凝胶层析图谱
使用Tips
使用方法
由于介质是以干粉的方式提供的，所以需要先溶胀，然后装填层析柱后使用。
缓冲液选择
一般选用水相缓冲液，缓冲液的pH和电导对于分离的效果影响不大，主要考虑样品在缓冲液中的稳定性。
流速
以推荐的流速运行，柱高越大流速越慢。
样品准备
为防止样品堵塞柱子，在上样前样品需要用0.45μm的微孔滤膜过滤，若目的物和杂质差别比较小，上样体积按照柱体积的1%~5%上样；若目的物和要去除的杂质差别比较大（如去除样品中的无机盐或缓冲液交换），上样体积按照柱体积的10%~25%上样。
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